携带小鼠信号转导子及转录激活子3重组慢病毒载体的构建与鉴定

摘要：

目的：构建携带小鼠信号转导子及转录激活子3(STAT3)的重组慢病毒载体,并检测 STAT3的蛋白表达,进行慢病毒包装并鉴定。方法将小鼠成肌细胞总 RNA 通过 STAT3引物逆转录为 cDNA PCR 扩增、回收后,同 pLVX-IRES-Zs-Green1载体片段连接,酶切鉴定及测序,将 pLVX-IRES-ZsGreen1-STAT3转染293 T 细胞,48 h 后收集细胞,Western blot 检测STAT3表达量,通过瞬时转染法包装出病毒上清。结果测序结果证实 STAT3成功插入 pLVX-IRES-ZsGreen1慢病毒载体,成功构建了慢病毒载体 pLVX-IRES-ZsGreen1-STAT3,共转染293 T 细胞48 h,Western blot 检测 STAT3表达量明显增强。测定病毒滴度为8.4×107 TU/mL。结论成功构建了 STAT3基因的重组慢病毒表达载体,为进一步应用奠定了基础。

关键词：信号转导子及转录激活子 3、慢病毒载体

分类号：R392.4

资助基金：重庆市科委自然科学基金资助项目2012JJA10002;重庆市卫生局基金资助项目20122296。

在线出版日期：2015-10-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：3803-3804,3807