重组人IL-4的克隆、表达和鉴定

摘要：

目的：构建人IL‐4重组表达载体，表达纯化并鉴定人IL‐4重组蛋白。方法采用巢式PCR技术从健康志愿者外周血单核细胞（PBMC）总RNA中扩增人IL‐4开放阅读框基因，将扩增的IL‐4目的基因与表达质粒pET101/D‐TOPO连接，转化大肠杆菌BL21，进行表达纯化和鉴定。结果采用巢式PCR扩增得到IL‐4开放阅读框大小为460 bp ，测序比对显示序列正确。转化BL21后，通过对不同克隆子表达水平的筛选，筛选到高表达 IL‐4的克隆子，表达和纯化后聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS‐PAGE）显示，其融合蛋白大小约为28×103，与目的蛋白大小一致。Western blot鉴定结果显示表达的蛋白正确，为人IL‐4目的蛋白。结论成功表达纯化到人IL‐4重组蛋白。

关键词：人白细胞介素4、表达、纯化

分类号：R73;R55

资助基金：国家自然科学基金资助项目31000415；四川省青年基金资助项目2012JQ0018；四川省教育厅基金资助项目13ZB0262。

在线出版日期：2014-06-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：1881-1883