DNMT3B mRNA 3′非编码区报告基因载体的构建与功能验证

摘要：

目的：构建用于鉴定microRNA（miRNA）靶基因的报告基因系统并进行功能验证，为研究动脉粥样硬化的发生发展机制奠定良好基础。方法在pGL3-control载体的荧光素酶基因下游克隆位点插入DNA甲基转移酶3B（DNMT3B）3′非编码区序列，经酶切、测序验证是否插入及正确性。生物信息学分析 DNMT3B与 miRNA-125b的靶向关系，并用 miRNA-125b过表达载体与所构建载体共转染人血管平滑肌细胞，双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性。结果成功构建了DNMT3 B 3′非编码区报告基因载体，经酶切和测序鉴定正确；共转染细胞24 h后，双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性，结果显示与空载体对照组相比，构建载体组荧光素酶活性下降了54．8％（P＜0．01）。结论成功构建了DNMT3B mRNA 3′非编码区报告基因载体，且提示miRNA-125b靶向调控了DNMT3B。

关键词：DNA甲基转移酶3B、微 RNAs、动脉粥样硬化、表遗传学、双荧光素酶报告基因系统

分类号：R3 ;TP3

资助基金：国家自然科学基金资助项目81200118；81260063；教育部新世纪优秀人才计划基金资助项目NCET-10-0916；宁夏区自然基金资助项目NZ12174。

在线出版日期：2014-06-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1587-1590