SIGIRR胞内区酵母双杂交诱饵质粒的构建及自激活作用检测

摘要：

目的：构建单免疫球蛋白白细胞介素-1受体相关蛋白（SIGIRR）胞内区酵母双杂交诱饵质粒，并检测其是否存在自激活作用。方法聚合酶链反应（PCR）扩增人SIGIRR胞内区基因片段（480～1230 bp），并将此基因片段重组入pSos载体中，构建诱饵质粒pSos-SIGIRR ，经酶切及测序鉴定构建正确后，将重组质粒与对照质粒共转化感受态酵母菌cdc25H ，接种于25℃SD/Glucose（-UL）和SD/Galactose（-UL）平板以及37℃ SD/Glucose（-UL）和SD/Galactose（-UL）平板上，连续观察6 d酵母菌生长状况；用Western blot法检测目的蛋白表达情况。结果正确构建了人SIGIRR胞内区酵母双杂交诱饵质粒pSos-SIGIRR ， pSos-SIGIRR在酵母双杂交系统中无自激活及毒性作用。Western blot结果显示，目的蛋白以170×103的融合蛋白形式表达。结论诱饵质粒pSos-SIGIRR可应用于酵母双杂交系统中，为在人肺互补脱氧核糖核酸（cDNA ）文库中寻找与SIGIRR相互作用蛋白奠定了重要基础。

关键词：免疫球蛋白白细胞介素1受体相关蛋白、双杂交系统技术、诱饵质粒、自激活

分类号：R39;R73

资助基金：国家自然科学基金资助项目30600272。

在线出版日期：2014-05-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1164-1167