FimH1-156融合基因的构建及其原核蛋白表达与纯化

摘要：

目的：构建含有与溶酶体膜蛋白2（LAMP-2）P41-49完全同源序列的尿路致病性大肠杆菌（UPEC）Ⅰ型菌毛FimH1-156为目的基因的原核载体，表达并纯化FimH1-156融合蛋白。方法采用PCR克隆pPKL241质粒获取 FimH1-156基因，插入原核表达载体pET28a（＋）；将重组表达质粒转染感受态 E ．coli BL21（DE3），经IPTG诱导表达 FimH1-156融合蛋白，超声裂解细菌，Ni-NTA层析法进行纯化，聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析、蛋白免疫印迹法（Western blot）对其进行鉴定。结果成功构建表达载体，经对融合蛋白表达条件的优化，在IPTG 浓度为1 mmol/L ，诱导4 h目的蛋白表达量最高，主要以包涵体形式存在；Western blot证实该FimH1-156融合蛋白可与抗6× His单克隆抗体发生结合反应。结论成功克隆FimH1-156融合蛋白表达基因并构建至原核表达载体，获得了包涵体纯化的Fim H1-156融合蛋白，为下一步建立实验动物模型奠定了基础。

关键词：Fim H1-156、融合蛋白、表达、纯化

分类号：R39;R94

资助基金：国家自然科学基金资助项目30971366；重庆市国际合作项目CSTC201110004；第三军医大学科研课题2011XLC37。

在线出版日期：2014-03-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：589-591