Ascl2 RNA干扰对结肠癌LS174T细胞EMT相关microRNA表达的影响

摘要：

目的：探讨转录因子Ascl2对结肠癌细胞上皮间质转化（EM T ）相关的微小RNA （microRNA ）的影响。方法对结肠癌LS174T细胞进行 Ascl2的 RNA 干扰质粒转染，对照质粒 shRNA-control/EGFP和干扰质粒 shRNA-Ascl2/EGFP 转染LS174T细胞，经G418筛选建立了稳定转染的细胞系，并分别命名为shRNA-Ctr/LS174T和shRNA-Ascl2/LS174T细胞，实时荧光定量PCR（real-time PCR）和蛋白印迹（Western-blot）实验确定干扰效果后，采用 Transwell小室侵袭实验观察Ascl2干扰对细胞侵袭能力的影响，再进一步行microRNA芯片筛选与EM T相关的microRNA并行real-time PCR验证。结果干扰后细胞中Ascl2的mRNA和蛋白质表达均明显减少（P＜0．01）。Ascl2干扰后LS174T细胞的侵袭能力明显下降（P＜0．01）。microRNA芯片筛选出与 EM T 相关的 microRNA-200家族（包括 microRNA-200b、microRNA-200a、microRNA-429、microRNA-200c、mi-croRNA-141）在Ascl2干扰后均出现2倍以上的上调（P＜0．01）。结论 Ascl2可能通过转录调节microR-200家族，进而调控EM T从而影响结肠癌的浸润转移。

关键词：转录因子Ascl2、微RNAs、上皮间质转化、结肠肿瘤、LS174T细胞

分类号：R73;R85

资助基金：国家自然科学基金资助项目81201685。

在线出版日期：2014-01-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：4361-4363,4367