HPV18E7重组质粒的构建及在大肠杆菌中的表达优化

摘要：

目的：构建HPV18E7基因重组质粒，并探索其在大肠杆菌中的最佳表达条件。方法以提取的 HeLa细胞株中的DNA为模板PCR扩增 HPV18E7基因；将HPV18E7基因与载体pET-32a（＋）连接为重组质粒pET-32a（＋）-HPV18E7；将该重组质粒转入大肠杆菌BL21-DE3-pLysS细胞中，探索优化表达的条件，以获得大量HPV18E7致癌蛋白。结果 PCR扩增的目标基因大小序列与HeLa细胞中的HPV18E7基因的大小序列一致。用LB培养基，IPTG和乳糖诱导表达显示不同浓度、不同温度、不同诱导起始量等表达量均不高，尝试用ZYM-5052自动诱导培养基诱导，HPV18E7融合蛋白的表达量远远高于用异丙基-β-D-硫代吡唃半乳糖苷（IPTG）和乳糖诱导表达的表达量。结论测序正确的 HPV18E7重组质粒在自动诱导培养基ZYM-5052中获得远远高于用异丙基-β-D-硫代吡唃半乳糖苷（IPTG）和乳糖诱导表达的HPV18E7融合蛋白。

关键词：HPV18、HPV18E7基因、HeLa细胞株、自诱导培养基

分类号：TQ3;R94

资助基金：重庆市教育委员会科技研究项目KJ110820

在线出版日期：2013-11-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：3647-3649