重组人C反应蛋白在甲醇酵母中的分泌表达及鉴定

摘要：

目的：构建重组人C反应蛋白（rhCRP）甲醇酵母分泌表达菌株，表达、纯化rhCRP并鉴定其免疫反应性。方法将人工设计合成的rhCRP基因克隆到甲醇酵母表达载体pPICZαA上，经SacⅠ线性化得到重组质粒pPICZαA/rhCRP后转化至甲醇酵母X-33中，利用甲醇诱导进行分泌表达，并用组氨酸标签进行亲和层析纯化 rhCRP。采用SDS-PAGE、Western blotting检测表达、纯化的目的蛋白，通过间接酶联免疫吸附试验（ELISA）鉴定其免疫反应性和稳定性。结果成功构建人CRP的重组甲醇酵母表达载体pPICZαA/rhCRP ，重组酵母菌株成功诱导分泌表达23×103的 rhCRP ；一步纯化即得纯度为90．42％的目的蛋白，间接ELISA法检测表明，纯化产物rhCRP具有特异的免疫反应性和一定的稳定性。结论利用甲醇酵母表达系统，成功获得了较高纯度的具有免疫反应性的rhCRP ，为下一步制备抗人CRP抗体及自主研发人CRP检测试剂提供重要的实验基础。

关键词：C反应蛋白质、甲醇酵母、诱导表达、分泌表达、免疫反应性

分类号：R73;R39

资助基金：国家自然科学基金资助项目31070822；辽宁省教育厅高校科研计划项目L2010015。

在线出版日期：2013-11-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：3390-3392