Notch1 miRNA干扰质粒构建及功能鉴定

摘要：

目的 设计及构建大鼠Notch1微小干扰核糖核酸(miRNA)干扰质粒,最终筛选出效果最好的干扰质粒.方法 针对大鼠Notch1基因分别设计3对pre-miRNA序列,通过T4连接酶克隆至pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miRNA表达载体构建干扰质粒,基因测序鉴定,经Lipofectamine 2000转染至H9c2心肌样细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光确定转染效率,Western blot检测3对干扰质粒、阴性对照质粒对Noteh1胞内结构域(N1ICD)表达的影响.结果 测序表明,Notch1干扰序列及读码框完全正确,荧光显微镜观察H9c2心肌样细胞miRNA瞬时转染效率在80％左右.Western blot显示miRNA6637对Notch1干扰效果最强.结论 成功构建大鼠Notch1 miRNA的有效干扰质粒.为Notch1信号通路在心血管领域的功能研究奠定了基础.

关键词：Notch信号通路、微小干扰核糖核酸、干扰质粒

所属期刊栏目：42

分类号：R73;R85

资助基金：国家自然科学基金资助项目81260024;江西省自然科学基金资助项目20122BAB205026;江西省研究生创新专项资金资助项目YC2011-B013

在线出版日期：2013-07-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1447-1449,1453