携带人金属蛋白酶组织抑制剂1重组腺病毒的构建及在人脐静脉内皮细胞中的表达

摘要：

目的 构建携带人金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP1)的重组腺病毒AdV-hTIMP1,感染体外培养的人脐静脉内皮细胞CRL-1730,观察其mRNA表达情况.方法 应用AdEasy复制缺陷型腺病毒载体系统在大肠埃希菌BJ5183中通过同源重组构建Ad-hTIMP1和对照Ad-Track.阳离子脂质体法将重组腺病毒转染到人胚胎肾细胞(HEK293T)中进行包装和扩增.纯化后PCR鉴定hTIMP1目的 基因,OD260法测定滴度,透射电镜观察腺病毒形态.将人脐静脉内皮细胞CRL-1730分为3组,空白对照组、Track对照组和TIMP1实验组,感染48 h后收集细胞,半定量PCR(RT-PCR)法检测内皮细胞中TIMP1 mRNA的表达情况.结果 重组腺病毒Ad-hTIMP1的滴度为1.9×1012v.p/mL.其感染人脐静脉内皮细胞CRL-1730后,实验组TIMP1 mRNA的表达明显升高(P<0.05).结论 成功构建了携带hTIMP1基因的重组腺病毒Ad-hTIMP1,成功感染了体外培养的人脐静脉内皮细胞CRL-1730,使细胞中hTIMP1过表达,为心血管疾病的基因治疗提供平台.

关键词：腺病毒、人、金属蛋白酶组织抑制剂1、基因治疗

所属期刊栏目：42

分类号：R73;R97

资助基金：天津市自然科学基金资助项目033609911

在线出版日期：2013-04-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：841-844