pcDNA3.1/Cx43真核表达质粒的构建及其在人神经胶质瘤U251细胞中的稳定过表达

摘要：

目的 建立稳定过表达pcDNA3.1/连接蛋白43(Cx43)重组质粒的人神经胶质瘤U251细胞系.方法 设计人Cx43的引物,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从低表达 Cx43的U251细胞中扩增出目的 片段,双酶切后定向连入pcDNA3.1载体,构建pcDNA3.1/Cx43真核表达质粒,经酶切、PCR、测序检测构建的正确性.采用脂质体转染法将重组质粒转入U251细胞,G418筛选出稳定转染的细胞系,采用RT-PCR、Western blot分别检测稳定转染pcDNA3.1/Cx43重组质粒的U251细胞中Cx43基因、蛋白的表达水平.结果 酶切、PCR及测序表明pcDNA3.1/Cx43重组质粒构建成功,筛选获得稳定过表达Cx43的U251细胞.结论 构建了pcDNA3.1/Cx43真核表达质粒及稳定过表达Cx43的U251细胞株,为下一步以Cx43为靶标进行人神经胶质瘤的基因治疗研究奠定了实验基础.

关键词：神经胶质瘤、转染、质粒、连接蛋白43、逆转录聚合酶链反应

所属期刊栏目：41

分类号：S85;S18

在线出版日期：2012-04-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：884-887