HBD3基因真核表达质粒载体的构建及其体外表达和活性鉴定

摘要：

目的 构建人β防御素3(HBD3)基因真核表达质粒载体,观察其在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)中的表达,并检测其活性.方法 利用RT-PCR方法从牙龈组织中扩增出HBD3基因片段,通过DNA重组技术将基因片段重组于pVIVO1-mcs真核表达质粒载体上,构建成pVIVO1-HBD3重组质粒载体,分别用酶切电泳分析及DNA测序的方法对重组质粒载体进行鉴定.运用jetPEI转染试剂将重组质粒转染BMSCs后,RT-PCR、免疫荧光和蛋白质印迹法检测目的 基因的表达.取转染重组质粒的BMSCs无血清上清的浓缩液,采用K-B纸片扩散法进行抗菌活性实验.结果 (1)酶切电泳分析得到相应的目的 片段,大小与理论计算值一致,DNA测序证实目的 基因序列正确无突变,成功构建真核表达质粒载体pVIVO1-HBD3.(2)RT-PCR和免疫荧光、蛋白质印迹法分别从mRNA和蛋白质2个水平证实转染的BMSCs高表达HBD3.(3)转染重组质粒的BMSCs无血清上清的浓缩液对白色念珠菌、大肠埃希菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌产生明显的抑菌环,证实了表达分泌出的HBD3的抗菌活性.结论 构建了pVIVO1-HBD3基因真核表达质粒载体,证实其转染BMSCs后基因的表达和活性.

关键词：β防御素、基因表达、间质干细胞、抗菌活性

所属期刊栏目：41

分类号：R65;R73

资助基金：国家自然科学基金资助项目30670636;重庆市自然科学基金资助项目2006BB5095

在线出版日期：2012-02-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：51-53,57