人单链白细胞介素12的原核表达和生物学活性鉴定

摘要：

目的 构建含人单链白细胞介素12(hscIL-12)基因的原核表达载体,在大肠杆菌中表达具有活性的hscIL-12.方法 PCR法从质粒pCA13- hscIL-12中扩增hscIL-12基因,经酶切、连接构建原核表达载体pET28a(+)-hscIL-12,转入到大肠杆菌BL21(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,收集菌液进行蛋白质印迹分析,经镍柱亲和层析(Ni2+-NTA)纯化,体外增殖实验检测其生物学活性.结果 PCR扩增、双酶切及DNA序列测定证实pET28a(+)载体上成功插入了hscIL-12基因片段.表达产物经SDS-PAGE电泳分析,证明其相对分子质量为70×103;蛋白质印记表明重组蛋白具有hscIL-12抗原活性;表达产物纯化、复性后进行体外生物学活性实验表明,该重组蛋白能刺激外周血单核细胞(PBMC)产生IFN-γ.结论 pET28a(+)-hscIL-12原核表达载体的构建和重组hscIL-12蛋白的制备为进一步研究hscIL-12生物学功能和临床应用奠定了基础.

关键词：人单链白细胞介素12、大肠杆菌、生物学活性、表达

所属期刊栏目：40

分类号：R39;R68

资助基金：贵州省科委重大攻关项目2004NGZ002;贵州省教育厅重点项目2004118

在线出版日期：2011-11-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：3124-3126