人S100A9重组腺病毒载体的构建和鉴定

摘要：

目的 制备人S100A9(hS100A9)重组腺病毒载体,为进一步研究人S100A9蛋白的分子生物学作用奠定基础.方法 从pHAHA-hS100A9中PCR扩增hS100A9片段,亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-TOX,获得重组穿梭质粒pAdTrack-TOX-hS100A9.酶切、聚合酶链反应(PCR)及测序鉴定正确后经PmeⅠ酶切电转入AdEasier感受态细胞,获得重组腺病毒质粒pAdhS100A9,该质粒经PacⅠ酶切后由脂质体转染至HEK293细胞中包装扩增重组腺病毒并进行滴度测定,最后通过PCR及蛋白印迹法(Western blot)鉴定重组腺病毒.结果 正确扩增出hS100A9基因;重组穿梭质粒pAdTrack-TOX-hS100A9均及重组腺病毒质粒pAdhS100A9构建成功,并在HEK293细胞中成功包装且扩增后滴度为1 010 IU/mL;重组腺病毒AdhS100A9在HEK293细胞中成功转录和表达.结论 用pAdEasy系统成功构建hS100A9重组腺病毒载体,为探讨其生物学作用奠定了基础.

关键词：钙粒蛋白B、腺病毒科、载体构建、鉴定

所属期刊栏目：40

分类号：R73;R3

资助基金：国家自然科学基金资助项目30772548

在线出版日期：2011-09-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：2231-2233