负载hTERT调控相关miR-138复制缺陷型腺病毒的包装及鉴定

摘要：

目的 包装负载人端粒酶逆转录酶(hTERT)调控相关miR-138前体全长cDNA(pre-miR-138)的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-miR138).方法 pre-miR-138全基因合成后插入腺病毒穿梭质粒(pDC315-miR138),与腺病毒包装质粒pBHGloxDeltaE1、3Cre共转染人胚肾293细胞(HEK293),包装Ad-miR138并大量扩增,收集纯化.对纯化后的Ad-miR138进行滴度测定、感染性鉴定、电镜鉴定及双引物PCR鉴定. 结果包装成功的腺病毒载体具有良好的感染性,纯化浓缩后的病毒滴度可达5×1010 pfu/mL. 电镜可见病毒在HEK293细胞中大量复制. PCR双引物鉴定Ad-miR138可扩增出Ad及pre-miR-138特异片段,而对照Ad-LacZ只能扩增出Ad特异片段,不能扩增出pre-miR-138特异片段.结论 成功包装了负载miR-138全长cDNA的复制缺陷型腺病毒载体,为进一步研究微RNAs(microRNAs)在肿瘤发生、发展中的作用,以及hTERT调控相关miR-138在肿瘤治疗中的价值奠定了基础.

关键词：RNA指导的DNA聚合酶、微RNAs、人胚肾293细胞、复制缺陷型腺病毒载体

所属期刊栏目：40

分类号：S85;S66

资助基金：重庆市自然科学基金资助项目2008BB5274,2009BB5314

在线出版日期：2011-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：896-898