人脐带血CD34+细胞的提取及慢病毒载体转染的初步研究

摘要：

目的 探讨人脐带血CD34+细胞提取以及慢病毒转染的方法.方法 脐带血20袋,采用直接梯度离心法,或6%羟乙基淀粉沉淀加梯度离心法收集单个核细胞,检测CD34+阳性率,经MACS磁珠分离获得CD34+细胞,分为完全培养基组、增强感染剂(ENis)组,过夜培养,每组按MOI 1:1、1:10、1:50加入带GFP标记的慢病毒载体进行转染,每小组再分组分别加入0、1、5ng/mL polybrene,转染后36～48h,3、5、7d分剐在荧光显微镜下观察转染情况.结果 直接梯度法获得的单个核细胞中红细胞含量高,CD34+阳性率为0.8%VS 1.2%.MACS分离获得CD34+细胞阳性率达84.6%以上.转染后观察增强感染剂组感染率低于完全培养基组,以MOI 1:50组荧光最强,但细胞死亡较多,加入5ng/mL polybrene组细胞大片快速裂解死亡,荧光持续时间短,以MOI 1:10结合1ng/mL polybrene组阳性率高且荧光表达持续时间长.结论 MOI 1:lO结合1ng/mL polybrene可能是慢病毒转染较理想的方法.

关键词：脐血、CD34+细胞、慢疯毒载体、基因转染

所属期刊栏目：37

分类号：R392.4;Q78

在线出版日期：2008-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：1570-1571,封2