携带IRES的hBDNF绿色荧光蛋白表达载体的构建和鉴定

摘要：

目的 构建表达人脑源性神经生长因子(hBDNF)基因的真核细胞表达载体,并且观察重组质粒在真核细胞中的表达情况.方法 采用PCR方法从健康人基因组中扩增出该基因,将hBDNF的PCR产物用Xho Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切后克隆到用Xho Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切的带有EGFP和内部核糖体转入位点(IRES)的真核细胞表达载体pIRES2-EGFP中.对重组质粒进行双酶切和质粒测序鉴定后,采用阳离子脂质体Lipofectamine 2000将重组的质粒转染至真核细胞中,用RT-PCR和荧光显微镜检测基因在细胞中表达的情况.结果 双酶切和质粒测序结果证明hBDNF已正确地克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP中,质粒能在细胞中正常表达.结论 成功构建了EGFP/hBDNF表达载体,为应用hBDNF治疗中枢神经系统疾病奠定坚实的基础.

关键词：人脑源性神经生长因子、重组质粒、转染

所属期刊栏目：37

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30170963及30540062

在线出版日期：2008-07-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1057-1059,封3