紫花苜蓿 MsWRKY33转录因子的分离及遗传转化研究

摘要：

WRKY 转录因子是植物特有的转录因子，广泛参与植物对多种逆境胁迫的反应。但是对紫花苜蓿中 WRKY转录因子的研究还较少。本研究从紫花苜蓿中克隆了一个 WRKY I 类转录因子 MsWRKY33。该基因 CDS 全长1536 bp，编码512个氨基酸，结构分析显示 MsWRKY33包括两个 WRKY 结构域和一个 C2H2锌指结构（C-X4-C-X23-H-X-H），表明其属于 WRKY I 族 WRKY 转录因子。亚细胞定位预测 MsWRKY33蛋白定位在细胞核。MsWRKY33基因受盐、干旱和冷胁迫诱导，暗示基因可能参与了这些逆境胁迫的调控。构建原核表达载体 pET-MsWRKY33，SDS－PAGE 分析表明在大肠杆菌中表达了 MsWRKY33蛋白。扩增 MsWRKY33编码区 cDNA，以pBI121为基础载体，构建植物超表达载体 pBI121-MsWRKY33。采用农杆菌介导的愈伤组织培养法转化紫花苜蓿。利用 nptⅡ基因引物和载体特异引物检测抗性苗呈阳性，表明目的基因已成功导入紫花苜蓿基因组中。qRT－PCR 检测发现，MsWRKY33基因在转基因株系中得到增强表达。本研究为进一步探索 WRKY 转录因子基因在紫花苜蓿抗逆性调控中的作用奠定了基础。

关键词：紫花苜蓿、MsWRKY33、转录因子、遗传转化

分类号：S64;S60

资助基金：现代农业产业技术体系牧草产业体系CARS-35-01;国家自然科学基金项目31101755;中国农业科学院科技创新工程ASTIP-IAS10资助。

在线出版日期：2015-12-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：48-57