正交设计优化山野豌豆SRAP-PCR反应体系与引物筛选

摘要：

采用正交试验设计,以山野豌豆叶片DNA为模板,从Mg2+、dNTP、引物和Taq DNA聚合酶4种因素3个水平,对山野豌豆SRAP- PCR反应体系进行优化,并比较了不同浓度模板DNA对扩增效果的影响,建立了山野豌豆的SRAP- PCR最佳反应体系.结果表明,山野豌豆SRAP- PCR最佳反应体系为:2μL 10×PCR buffer(不含Mg2+)、30 ng的模板DNA、引物2.0 μmol/L、Mg2+ 2.0 mmol/L、Taq DNA聚合酶1.5U、dNTP 0.2mmol/L,总体积为25 μL.各因素对扩增反应结果均有不同影响,其中以引物浓度影响最大,dNTP浓度的影响最小.运用该体系对3份山野豌豆种源进行验证,证明该体系稳定可靠,并从98对SRAP引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的20对引物组合.这一体系的建立及多态性引物组合的筛选为SRAP分子标记技术进行山野豌豆分子遗传学研究奠定了基础.

关键词：山野豌豆、SRAP、PCR体系优化、正交设计、引物筛选

所属期刊栏目：21

分类号：Q943(植物学)

资助基金：十二五国家科技支撑项目2011BAD17B01-02

在线出版日期：2013-01-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：325-330