下调miR-208a通过靶向SFRP1介导Wnt信号通路对结直肠癌细胞5-FU耐药的改善作用
目的:探讨下调微小RNA-208a(miR-208a)对结直肠癌细胞5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药的影响,阐明其相关分子机制.方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测结直肠癌5-FU耐药细胞株HT-29/5-FU及其亲本HT-29细胞中miR-208a和分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)mRNA表达水平.以HT-29/5-FU细胞为研究对象,将miR-208a抑制物(miR-208a inhibitor)质粒及其阴性对照质粒(inbibitor-NC)和SFRP1小干扰质粒(si-SFRP1)及其阴性对照质粒(si-NC)分别或同时转染至HT-29/5-FU细胞中,联合5-FU处理,将细胞分为空白组、inhibitor-NC组、miR-208a inhibitor组、miR-208a inhibitor+si-NC组和 miR-208a inhibitor+si-SFRP1 组.MTT 法检测各组细胞增殖活性并计算耐药指数,Annexin V-FITC/PI双染法结合流式细胞术检测不同浓度5-FU作用后各组细胞凋亡率,W estern blotting法检测各组细胞中SFRP1、β-连环蛋白(β-catenin)、P-糖蛋白(P-gp)和ATP结合盒B亚家族成员1转运蛋白(ABCB1)蛋白表达水平.双荧光素酶报告基因实验验证miR-208a与SFRP1的靶向关系.结果:与HT-29细胞比较,HT-29/5-FU细胞中miR-208a表达水平升高(P＜0.05),SFRP1 mRNA表达水平降低(P＜0.05).与 inhibitor-NC组比较,miR-208a inhibitor组细胞增殖活性降低(P＜0.05),耐药指数降低,细胞凋亡率升高(P＜0.05),细胞中β-catenin、P-gp和ABCB1蛋白表达水平降低(P＜0.05).双荧光素酶报告基因实验提示SFRP1是miR-208a靶基因,且miR-208a 可负向调控 SFRP1 的表达.与 miR-208a inhibitor+si-NC 组 比较,miR-208a inhibitor+si-SFRP1组细胞增殖活性升高(P＜0.05),耐药指数升高,细胞凋亡率降低(P＜0.05),细胞中β-catenin、P-gp和ABCB1蛋白表达水平升高(P＜0.05).结论:下调miR-208a可通过靶向上调SFRP1表达抑制Wnt信号通路的转导,进而改善HT-29/5-FU细胞对5-FU的耐药.
结直肠肿瘤、微小RNA-208a、分泌型卷曲相关蛋白1、Wnt信号通路、5-氟尿嘧啶、耐药性
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R735.1(肿瘤学)
湖南省科技厅创新型省份建设专项科普专题项目;湖南省卫健委科研项目;湖南省卫健委科研项目
2024-08-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共9页
947-955
