尿石素C对人急性髓系白血病HL-60细胞增殖、凋亡和自噬的影响及其机制
目的:探讨尿石素C(UC)对急性髓系白血病(AML)HL-60细胞增殖、凋亡和自噬的影响,阐明其相关作用机制.方法:HL-60细胞分为不同浓度(0、20、40、60、80及100 μmol·L-1)尿石素A(UA)、尿石素B(UB)和UC组,采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性,光学显微镜观察不同浓度UC组细胞形态表现;HL-60细胞分为不同浓度(0、20、40及80 μmol·L-1)UC组和3-甲基腺嘌呤(3-MA)联合不同浓度(0、20、40及80 μmol·L-1)UC组,采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性.HL-60细胞分为对照组和不同浓度(20、40及80 μmol·L-1)UC组,采用活/死细胞染色法检测各组死细胞率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,细胞自噬染色检测试剂盒[单丹磺酰戊二胺(MDC)法]检测各组细胞自噬情况,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中苄氯素1(Beclin1)、自噬相关蛋白9(ATG9)和自噬相关蛋白7(ATG7)mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、活化的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、微管相关蛋白1轻链3(LC-3)、细胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)、AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)和磷酸化AMPK(p-AMPK)蛋白表达水平.结果:CCK-8法,培养24、48和72h,分别与0 μmo1·L-1 UA、UB和UC组比较,不同浓度UA、UB和UC组细胞增殖活性均降低(P＜0.05或P＜0.01),且呈浓度和时间依赖性;48h时,与UA和UB比较,UC半数抑制浓度(IC50)最低.细胞形态表现,与对照组比较,随着UC浓度升高,细胞间连接和细胞数量减少,细胞碎片增加.CCK-8法,与40和80 μmol·L-1 UC组比较,3-MA联合40和80μmol·L-1 UC组细胞增殖活性升高(P＜0.05或P＜0.01).活/死细胞染色,与对照组比较,40和80 μmol·L-1 UC组死细胞率升高(P＜0.01).流式细胞术,与对照组比较,80 μmol·L-1 UC组细胞凋亡率升高(P＜0.01).MDC法,与对照组比较,随着UC浓度升高,不同浓度UC组细胞绿色荧光逐渐增强.RT-qPCR法,与对照组比较,80 μmol·L-1 UC组细胞中Beclin 1、ATG9和ATG7 mRNA表达水平升高(P＜0.01).Western blotting 法,与对照组比较,20、40 和 80 μmol·L-1 UC 组细胞中 Cleaved Caspase-3 蛋白表达水平升高(P＜0.01),80 μmol·L-1UC组细胞中膜型LC3/胞浆型LC3(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ)比值升高(P＜0.05),40 和 80 μmol·L-1 UC 组细胞中 p-AMPK/AMPK 及 p-ERK/ERK 比值升高(P＜0.01).结论:UC可抑制人AML HL-60细胞增殖,诱导其细胞凋亡和自噬,并可提高细胞中ERK和AMPK蛋白磷酸化水平.
尿石素C、白血病细胞、细胞增殖、细胞凋亡、细胞自噬
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R733.71;R979.19(肿瘤学)
国家自然科学基金;国家自然科学基金;山东省泰山学者青年专家;齐鲁卫生与健康杰出青年人才项目;山东省卫健委中医药科技基金项目
2024-08-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共9页
908-916
