卡氏棘阿米巴肌动蛋白1的免疫学特性和细胞黏附功能
目的:探讨卡氏棘阿米巴(Ac)肌动蛋白1(Actin 1)(Ac-Actin 1)的免疫学特性,初步阐明Ac-Actin 1介导Ac虫体黏附宿主细胞并参与Ac虫体入侵的作用.方法:以Ac滋养体cDNA为模板,构建原核表达载体pET 22b(+)-Ac-Actin 1,转化大肠埃希菌感受态细胞BL21(DE3);1 mmol·L-1异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)体外诱导表达重组Ac-Actin 1蛋白(rAc-Actin 1),十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对rAc-Actin 1进行可溶性分析,通过亲和层析方法纯化带有His标签的rAc-Actin 1.3只新西兰白兔随机分为对照组(1只)和实验组(2只);实验组兔以rAc-Actin 1为免疫原皮下注射400μg,对照组兔注入等量生理盐水,制备抗rAc-Actin 1多克隆兔血清;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测2组兔抗rAc-Actin 1多克隆抗体效价并测定IgG亚型,Western blotting法检测抗rAc-Actin 1多克隆兔血清与rAc-Actin 1的免疫反应性,间接免疫荧光实验(IFA)检测Ac-Actin 1在Ac滋养体中的定位.以正常滋养体为对照,抗rAc-Actin 1多克隆兔血清阻断Ac滋养体后与Vero细胞共孵育,显微镜观察Ac-Actin 1对Vero细胞的黏附作用.结果:SDS-PAGE和BCA蛋白浓度检测,获得高浓度rAc-Actin 1(1.7 g·L-1)蛋白.ELISA法检测,制备的兔抗rAc-Actin 1特异性多克隆抗体效价为1:6400,IgG1和IgG2a浓度分别为116.76 g·L-1和1136.15 mg·L-1.Western blotting法检测,兔抗rAc-Actin 1多克隆抗体可与rAc-Actin 1发生特异性结合,具有良好的免疫反应性.IFA检测,rAc-Actin 1主要定位于Ac滋养体的细胞膜上.显微镜观察,与对照组比较,随着抗体与虫体孵育时间的延长,实验组Ac滋养体对Vero细胞的黏附率明显降低(P<0.01),抗rAc-Actin 1特异性多克隆抗体可有效阻断Ac滋养体与Vero细胞的黏附.结论:rAc-Actin 1具有良好的免疫原性和免疫反应性,参与Ac虫体与宿主细胞的黏附作用.
卡氏棘阿米巴、滋养体、细胞黏附、免疫原性、免疫反应性
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R382.1(医学寄生虫学)
吉林省科技厅自然科学基金项目;吉林省卫健委卫生与健康技术重点创新项目;吉林省教育厅科学技术重点研究项目
2023-05-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
308-314
