复发性流产患者绒毛组织中miR-27a表达对滋养细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制
目的:探讨复发性流产(RM)患者绒毛组织中miR-27a的表达,阐明其对滋养细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法:收集17例RM患者(RM组)和正常妊娠妇女(健康对照组)的绒毛组织,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测绒毛组织中miR-27a表达水平.体外培养人绒毛滋养细胞HTR-8/SVneo,利用脂质体瞬时转染技术将miR-27a模拟物(miR-27a mimic)、miR-27a抑制剂(miR-27ainhibitor)和miR-27a阴性对照(miR-NC)序列转染入滋养细胞中,同时设不转染的对照组,RT-qPCR法检测转染效率后,分别采用CCK-8法和EdU实验检测各组细胞增殖活性和EdU阳性细胞率,流式细胞术检测各组不同细胞周期细胞百分率,AnnexinⅤ-FITC/PI法检测各组细胞凋亡率.应用生物信息学分析miR-27a的作用靶基因,筛选周期蛋白D1(Cyclin D1)和胰岛素样生长因子1(IGF1)进行验证,采用荧光素酶靶基因报告实验、RT-qPCR法和Western blotting法检测miR-27a与Cyclin D1和IGF1的调控关系.采用RT-qPCR法和免疫组织化学染色检测RM组和健康对照组受试者绒毛组织中Cyclin D1和IGF1 mRNA及蛋白表达水平,采用Pearson相关分析法对miR-27a与Cyclin D1和IGF1 mRNA表达水平的相关性进行分析.结果:与健康对照组比较,RM组患者绒毛组织中miR-27a表达水平明显升高(P<0.01).与对照组比较,miR-27a mimic组细胞中miR-27a表达水平明显升高(P<0.01),miR-27a inhibitor组细胞中miR-27a表达水平明显降低(P<0.01),miR-NC组细胞中miR-27a表达水平差异无统计学意义(P>0.05).与对照组比较,miR-27a mimic组细胞增殖活性和S期细胞百分率均明显降低(P<0.05),G0/G1期细胞百分率和细胞凋亡率均明显升高(P<0.05);而miR-27a inhibitor组细胞增殖活性和S期细胞百分率均明显升高(P<0.05),G0/G1期细胞百分率和细胞凋亡率均明显降低(P<0.05);miR-NC组细胞中上述各指标差异无统计学意义(P>0.05).荧光素酶靶基因报告实验、RT-qPCR法和Western blotting法检测证实miR-27a能靶向抑制Cyclin D1和IGF1的表达.与健康对照组比较,RM组患者绒毛组织中Cyclin D1和IGF1 mRNA及蛋白水平表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01),且RM患者绒毛组织中Cyclin D1和IGF1 mRNA表达水平与miR-27a表达水平呈明显负相关关系(r=-0.214,P<0.05;r=-0.307,P<0.05).结论:在RM患者绒毛组织中异常升高的miR-27a可能通过靶向调控Cyclin D1和IGF1的表达,阻滞滋养细胞的周期进展,抑制其增殖,并促进细胞凋亡.
复发性流产、微小RNA-27a、周期蛋白D1、胰岛素样生长因子1、滋养细胞
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R714.21(妇产科学)
海南省卫健委卫生健康行业科研项目19A200038
2022-08-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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