沉默DNMT3a表达对银屑病样细胞周期进展和细胞增殖的抑制作用及其机制

摘要：

目的:探讨沉默DNA甲基化转移酶3a(DNMT3a)表达对银屑病样HaCaT细胞周期进展和细胞增殖的抑制作用,阐明其可能机制.方法:收集15例寻常性银屑病患者皮损组织(银屑病组)与15名健康者皮肤组织(对照组).实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组研究对象皮肤组织中DNMT3a mRNA表达水平.siRNA转染技术将沉默DNMT3a表达的si-DNMT3a转染至HaCaT细胞中,RT-qPCR和Western blotting法检测si-DNMT3a的转染效率.采用M5方法诱导HaCaT细胞并建立银屑病样细胞模型,将细胞分为对照组、si-DNMT3a组、si-NC组和HaCaT组.CCK-8法检测各组细胞增殖率,流式细胞术检测不同细胞周期各组细胞百分率,AnnexinⅤ-FITC实验检测各组细胞凋亡率.MSP实验检测银屑病组和对照组研究对象皮肤组织中LATS1基因启动子区甲基化水平.Western blotting法检测各组细胞中大肿瘤抑制基因1(LATS1)、Yes-相关蛋白1(YAP1)、Cyclin D1、CDK6和cleaved caspase-3蛋白表达水平.结果:与对照组比较,银屑病组患者皮肤组织中DNMT3a mRNA表达水平明显升高(P<0.01).与HaCaT组比较,si-NC组HaCaT细胞中DNMT3a mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05).与HaCaT组比较,对照组、si-NC组和si-DNMT3a组HaCaT细胞增殖率和S期HaCaT细胞百分率均升高(P<0.05),G1期细胞百分率和细胞凋亡率均降低(P<0.05);与对照组和si-NC组比较,si-DNMT3a组HaCaT细胞增殖率和S期HaCaT细胞百分率均降低(P<0.05),细胞凋亡率和G1期HaCaT细胞百分率升高(P<0.05).MSP检测,银屑病组患者皮肤组织中LATS1启动子甲基化水平较对照组升高(P<0.01).Western blotting检测,与HaCaT组比较,对照组、si-NC组和si-DNMT3a组HaCaT细胞中YAP1、Cyclin D1及CDK6蛋白表达水平明显升高(P<0.05),LATS1和cleaved caspase-3蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与对照组和si-NC组比较,si-DNMT3a组HaCaT细胞中YAP1、Cyclin D1和CDK6蛋白表达水平降低(P<0.05),LATS1和cleaved caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.05).结论:沉默DNMT3a表达可能通过降低LATS1的甲基化水平并下调YAP1的表达,从而抑制银屑病样HaCaT细胞周期进展和细胞增殖,并诱导细胞发生凋亡.

关键词：银屑病、DNA甲基化转移酶3a、大肿瘤抑制基因1、Yes-相关蛋白

所属期刊栏目：48

分类号：R758.63(皮肤病学与性病学)

资助基金：广西壮族自治区卫生健康委员会自筹经费科研课题项目;广西壮族自治区南宁市科技局科学研究与技术开发计划项目

在线出版日期：2022-06-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：773-782