骨髓间充质干细胞来源外泌体诱导自噬对MPP+抑制SH-SY5Y细胞存活的影响及其机制
目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)来源外泌体(Exo)诱导自噬对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)抑制人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞存活的影响,阐明其作用机制.方法:将人神经细胞肿瘤SH-SY5Y细胞分别给予不同浓度(0、0.25、0.50、1.00和2.00 mmol·L-1)MMP+作用24和48 h后检测各组细胞存活率.实验分为对照组[给予磷酸盐缓冲液(PBS)]、MPP+组(给予0.50 mmol·L-1 MPP+)、MPP++BMSCs的上清液(BMSCs-Sup)组(给予0.50 mmol·L-1 MPP+和BMSCs Sup)、MPP++BMSCs-Exo组(给予0.50 mmol·L-1 MPP+和100 mg·L-1 BMSCs Exo)、MPP++雷帕霉素(Rap)组(给予0.50 mmol·L-1 MPP+和2 mmol·L-1 Rap)和MPP++BMSCs-Exo+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(给予0.50 mmol·L-1 MPP+、100 mg·L-1 BMSCs-Exo和1 mmol·L-13-MA).MTT法检测各组SH-SY5Y细胞存活率,共聚焦显微镜下观察吖啶橙染色后各组SH-SY5Y细胞中自噬酸性囊泡荧光强度,Western blotting法检测各组细胞中CD63、TGS101和Calnexin蛋白表达情况.结果:MTT检测,SH-SY5Y细胞存活率随着MPP+浓度的升高或处理时间的延长逐渐降低(P<0.05),且呈浓度和时间依赖性.与MPP+组比较,MPP++BMSCs-Sup组、MPP++BMSCs-Exo组和MPP++Rap组SH-SY5Y细胞存活率升高(P<0.05);与MPP++BMSCs-Exo组比较,MPP++BMSCs-Exo+3-MA组SH-SY5Y细胞存活率降低(P<0.05).细胞吖啶橙染色,与MPP+组比较,MPP++BMSCs-Sup组、MPP++BMSCs-Exo组和MPP++Rap组SH-SY5Y细胞中自噬酸性囊泡荧光强度增加(P<0.05);与MPP++BMSCs-Exo组比较,MPP++BMSCs-Exo+3-MA组SH-SY5Y细胞中自噬酸性囊泡荧光强度降低(P<0.05).Western blotting法检测,各组细胞中外泌体标志蛋白CD63和TGS101蛋白高表达,内质网标志蛋白Calnexin低表达.结论:BMSCs-Exo通过激活细胞自噬抵抗MPP+诱导的SH-SY5Y细胞存活率下降.
外泌体、骨髓间充质干细胞、自噬、细胞存活率、SH-SY5Y细胞
48
R285.5(中药学)
吉林省科技厅科技发展计划项目20200404125YY
2022-06-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共9页
606-614
