GLI1真核表达载体的构建、鉴定及其对肺癌PC9细胞增殖的影响
目的:构建GLI1真核表达载体,探讨过表达GLI1对肺癌PC9细胞增殖的影响.方法:采用PCR法扩增GLI1基因的全长序列,克隆至pcDNA3.1真核表达载体,将重组质粒pcDNA3.1-GLI1(重组质粒组)和对照质粒pcDNA3.1(空载体组)转染肺癌PC9细胞.采用酶切鉴定法检测GLI1过表达载体的构建情况.通过G418筛选建立稳定过表达GLI1的PC9细胞和空载体对照细胞.RT-PCR法检测2组PC9细胞中GLI1 mRNA表达水平,Western blotting法检测2组PC9细胞中GLI1蛋白表达水平,CCK-8法检测2组PC9细胞增殖活性,细胞克隆形成实验检测2组PC9细胞中克隆形成数.结果:成功扩增获得GLI1的特异基因片段;构建的GLI1真核表达载体经双酶切鉴定后分别获得目的基因和载体片段.RT-PCR法检测,重组质粒组PC9细胞中GLI1 mRNA表达水平明显高于空载体组(P<0.01).Western blotting法检测,重组质粒组PC9细胞中GLI1蛋白表达水平明显高于空载体组(P<0.05).CCK-8法检测,培养72和96 h后,重组质粒组细胞增殖活性明显高于空载体组(P<0.01).细胞克隆形成实验,培养10 d时,重组质粒组细胞克隆形成数明显多于空载体组(P<0.01).结论:成功构建GLI1基因的真核过表达载体和过表达GLI1稳定转染的PC9细胞系,GLI1过表达能够促进肺癌PC9细胞的增殖能力.
肺肿瘤、GLI1、细胞增殖、PC9细胞、真核表达载体
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R734.2(肿瘤学)
国家自然科学基金资助课题;山东省科技厅科学基金资助课题;山东省卫生厅医药卫生科技发展计划项目资助课题;滨州医学院科研计划与科研启动基金资助课题
2020-12-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
1150-1154,后插3
