一种高效稳定的磷酸钙转染293T细胞方法的建立及评价

摘要：

目的:探讨2种磷酸钙转染法转染293 T细胞的效果,建立一种实现高效稳定磷酸钙转染293 T细胞的方法.方法:荧光显微镜观察采用2种磷酸钙转染方法(传统磷酸钙转染法和改良磷酸钙转染法)转染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞的转染效率.采用Real-time PCR法和Western blotting法分别检测2种磷酸钙转染方法转染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞后,肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)mRNA和flag蛋白表达水平.结果:荧光显微镜下观察,与传统磷酸钙转染法比较,改良磷酸钙转染法转染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞24和48 h后的转染效率明显升高(P<0.01);Real-time PCR法和Western blotting法检测,与传统转染方法比较,磷酸钙转染改良法转染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞24和48 h后,TRAF6 mRNA和flag蛋白表达水平均明显升高(P<0.01).结论:本研究建立的改良磷酸钙转染方法是一种高效、稳定的DNA转染方法.

关键词：磷酸钙转染、293T细胞、肿瘤坏死因子受体相关因子6、flag蛋白

所属期刊栏目：45

分类号：Q819(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金资助课题81702424,81872364;国家卫健委临床重点专科建设项目普通外科资助课题2013;福建省科技厅自然科学基金资助课题2018J05127;福建省卫健委中青年骨干项目资助课题2018-ZQN-46;福建省教育厅中青年教师教育科研项目资助课题JAT170239

在线出版日期：2019-10-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1177-1181,前插5