刚地弓形虫肌动蛋白profilin的原核表达和纯化

摘要：

目的:探讨刚地弓形虫肌动蛋白profilin(TgPRF)的原核表达体系和纯化条件,为后续的抗肿瘤免疫佐剂研究提供依据.方法:以弓形虫RH株速殖子的cDNA为模板,采用一对特定的引物扩增TgPRF基因的编码区.PCR产物双酶切后克隆入pET28a(+)载体中.重组的pET28a(+)-TgPRF质粒转化E.coli DH5α感受态细胞.双酶切鉴定阳性克隆,并选取测序正确的质粒转化E.coli BL21(DE3)表达菌,经IPTG诱导表达4 h,SDS-PAGE法检测TgPRF蛋白的表达,Western blotting法检测重组蛋白His-prolilin的表达.结果:PCR扩增产物长度为492 bp.经双酶切和测序,重组质粒pET28a-TgPRF连接产物构建成功.SDS-PAGE检测,目的蛋白在超声菌液的上清中表达.经Ni-NTA琼脂糖凝胶柱纯化,获得纯化的TgPRF蛋白(纯度>90%).Western blotting检测,重组TgPRF蛋白能被Anti-His抗体识别.结论:成功构建重组质粒pET28a-TgPRF,并实现可溶性原核表达.

关键词：刚地弓形虫、profilin、原核表达、蛋白纯化

所属期刊栏目：43

分类号：R382.5(医学寄生虫学)

资助基金：吉林省科技厅自然科学基金资助课题20150101127JC

在线出版日期：2017-12-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1109-1114