人源极光激酶A在毕赤酵母和MCF-7细胞中的表达及纯化

摘要：

目的:构建人源极光激酶A(AURKA)真核表达载体,检测其在毕赤酵母X33和MCF-7细胞中的表达及纯化.方法:将双酶切PCR扩增的目的基因与真核表达载体连接,构建重组质粒.电转法转染重组质粒,筛选后采用SDS-PAGE和Western blotting法检测AURKA蛋白的表达,Ni-NTA柱法纯化表达的蛋白;放射自显影法检测AURKA的生物活性;细胞计数法检测转染重组质粒后MCF-7细胞增殖情况.结果:2种重组质粒经PCR均扩增出1 212 bp目的基因,表明真核表达载体构建成功.重组AURKA蛋白相对分子质量约为50 000,且可磷酸化其底物组蛋白H3,表明重组AURKA具有活性.与转染空质粒和野生型MCF-7细胞比较,转染AURKA 24 和48 h后MCF-7活细胞数量明显增加.结论:AURKA在毕赤酵母和MCF-7细胞中成功表达和纯化,且其过表达可促进细胞增殖.

关键词：人源激光激酶A、毕赤酵母X33、MCF-7细胞、细胞增殖

所属期刊栏目：43

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：吉林省科技厅科研基金资助课题20130206010YY

在线出版日期：2017-04-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：266-270