Hath1基因真核表达载体的构建及其在SH-SY5Y细胞中的表达

摘要：

目的:构建携带Hath1基因的真核表达载体并转染神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y),观察其在SH-SY5Y细胞中的表达.方法:从人全血中提取DNA,克隆Hath1基因,同时扩增绿色荧光蛋白(GFP) gfp基因；利用引物GFP-R和Hath1-F扩增融合基因gfp-Hath1,克隆至pMD18-T中；经Xho Ⅰ和EcoR Ⅰ限制性内切酶酶切,构建重组表达质粒pCDNA3.1(+)::gfp-Hath1；转染SH-SY5Y细胞.结果:PCR扩增,融合基因gfp-Hath1扩增条带大小为2 023 bp,表明成功扩增gfp-Hath1融合基因.经双酶切鉴定,成功构建真核表达质粒pCDNA3.1(+)::gfp-Hath1.采用间接免疫荧光技术在荧光显微镜下观察到5H-SY5Y细胞中有GFP表达.结论:本研究成功地使Hath1基因在SH-SY5Y细胞中得到表达,为转染耳蜗组织的实验及探索治疗耳聋新方法奠定基础.

关键词：Hath1基因、gfp基因、真核表达、荧光显微镜

所属期刊栏目：39

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金资助课题81160551/H2818;内蒙古自治区高等学校科学研究项目资助课题NJZY13162

在线出版日期：2015-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：759-762,后插4