人p21活化激酶6基因截短区域的GST标签原核表达质粒的构建及其重组蛋白的表达

摘要：

目的:构建人p21活化激酶6(PAK6)的各个截短区域原核表达质粒,并诱导和鉴定其融合蛋白的表达,为探讨PAK6基因的生物学功能提供依据.方法:以真核表达质粒pcDNA3.1-GFP-PAK6为模板,PCR扩增出PAK6基因的各个截短片段.所获得的各截短片段经EcoR Ⅰ/Xho Ⅰ双酶切后克隆至GST标签的原核表达载体pGEX-5X-1中.将构建的PAK6各截短质粒转化入Ecoli BL21中,采用IPTG诱导PAK6基因截短融合蛋白表达,采用Western blotting法鉴定PAK6基因截短融合蛋白的表达.结果:EcoR Ⅰ/Xho Ⅰ双酶切后得到与预期大小相符的载体片段(5 000 bp)和PAK6 1-55(165 bp)、PAK6 56-210(465 bp)、PAK6 211-410(600 bp)及PAK6 385-681(891 bp)4个片段.Western blotting检测,PAK6各截短区域质粒GST-PAK6截短融合蛋白相对分子质量分别为32 000、43 000、48 000和60 000.结论:成功构建PAK6基因各个截短区域GST标签原核表达质粒并表达其重组蛋白.

关键词：P21活化激酶、截短区域、原核表达质粒、GST融合蛋白

所属期刊栏目：39

分类号：R736(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金资助课题31171360

在线出版日期：2015-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：437-440