内毒素对过氧化氢引起的神经胶质瘤C6细胞损伤的影响
目的:观察内毒素(LPS)对过氧化氢(H2O2)诱导的神经胶质瘤C6细胞损伤的影响,探讨其相关机制.方法:C6细胞按处理方法不同分为空白对照组、100 μmol·L-1LPS组、1 000 μmol·L-1 H2O2组及1 000 μmol·L-1 H2O2与100 μmol·L-1 LPS联合应用组.药物作用C6细胞6 h,取培养液上清与细胞沉淀,利用LDH检测试剂盒,采用紫外分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率;原位末端标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡率;应用RT-PCR检测相关基因Bel-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达;Western blotting检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、细胞色素C(Cyt-C)及CLIC4蛋白水平.结果:与空白对照组比较,100 μmol·L-1 LPS组C6细胞凋亡率及LDH释放率增加(P＜0.05),在mRNA水平上Bcl-2、Bax表达率未见明显改变(P＞0.05),而Caspase-3表达率升高(P＜0.05);在蛋白水平上,与空白对照组比较,Bcl-2、Bax、CLIC4及胞浆Cyt-C蛋白水平未见明显变化(P＞0.05),而Caspase-3蛋白水平高于空白对照组(P＜0.05).与空白对照组比较,1 000 μmol·L-1 H2O2组C6细胞凋亡率及LDH释放率增加(P＜0.05);在mRNA水平上Bcl-2表达率低于空白对照组(P＜0.05),Bax、Caspase-3表达率高于空白对照组(P＜0.05);在蛋白水平上,Bcl-2蛋白表达低于空白对照组(P＜0.05),Bax、Caspase-3、CLIC4及胞浆Cyt-C蛋白水平明显高于空白对照组(P＜0.05).与H2O2组和LPS组比较,LPS与H2O2联合作用组细胞凋亡率及LDH释放率明显增加(P＜0.05),在mRNA水平上Bcl-2表达率下降(P＜0.05),Bax、Caspase-3表达率升高(P＜0.05);在蛋白水平上,Bcl-2蛋白表达低于对照组(P＜0.05),Bax、Caspase-3及胞浆Cyt-C蛋白水平明显高于对照组(P＜0.05),而CLIC4蛋白水平变化不明显(P＞0.05).结论:单独应用LPS能够激活Caspase-3信号通路,引起C6细胞早期凋亡,同时LPS能促进H2O2引起的C6细胞损伤,其机制可能与凋亡相关的Bcl-2/Bax及Caspase-3途径过度激活有关.线粒体氯通道蛋白CLIC4在此过程中作用不明显.
内毒素、过氧化氢、线粒体氯通道蛋白、C6细胞、细胞凋亡
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R363;R739.4(病理学)
国家自然科学基金资助课题30570687
2015-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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