人白细胞介素24基因的克隆及在大肠杆菌中的高效表达

摘要：

目的:构建人白细胞介素24(hIL-24)基因原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达hIL-24蛋白,并测定其生物学活性.方法:用PCR方法从含有hIL-24的质粒中扩增hIL-24 cDNA序列,测序鉴定正确后,应用基因重组技术构建PQE/hIL-24,并转入大肠杆菌(E.coli) M15.IPTG诱导表达目的蛋白,镍凝胶亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE电泳和免疫印迹分析鉴定结果,应用外周血单核细胞(PBMCs),通过ELESA法分别在48和72 h检测rhIL-24刺激的PBMCs中IL-8、IFN-γ及TNF-α产生情况.结果:获得与GenBank中报道一致的hIL-24基因片段.SDS-PAGE电泳和免疫印迹分析显示,获得具有hIL-24免疫原性、相对分子质量约为18400目的蛋白.Ni2+-NTA agarose纯化得到单一条带蛋白,获得rhIL-24蛋白刺激的PBMCs,PBMCs分泌IL-6、IFN-γ、TNF-α的水平显著高于未刺激前分泌水平(P<0.05),rhIL-24具有与天然hIL-24蛋白相同的生物学活性.结论成功地构建了hIL-24的原核表达载体,在E.coli中高效表达了rhIL-24蛋白,获得了与天然hIL-24蛋白具有相同生物学活性的rhIL-24.

关键词：白细胞介素24、干扰素Ⅱ型、白细胞介素6、瘤坏死因子

所属期刊栏目：34

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：吉林省杰出青年科学基金20050113;吉林省科技厅国际合作项目20060722

在线出版日期：2008-05-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：266-269