核心蛋白聚糖真核表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达

摘要：

目的:构建人核心蛋白聚糖(DCN)真核表达载体,并在CHO细胞中进行表达,为进一步研究其抗肿瘤作用奠定基础.方法:以含有人DCN cDNA的质粒pBluescript为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增目的基因片段.真核表达载体pcDNA3及PCR产物经XbaⅠ和EcoRⅠ双酶切后连接,转化大肠杆菌JM109,获得重组载体pCDNA-DEC,进行酶切鉴定和测序鉴定.脂质体lipofectamine介导重组载体转染CHO细胞,经G418(800 mg·L-1)筛选建立稳定转染细胞株.采用细胞免疫组织化学方法检测稳定转染CHO细胞中DCN表达.结果:PCR获得与预期大小一致约1 000 bp的特异性DNA片段;重组载体pCDNA-DEC经双酶切鉴定及测序证实,人DCN基因cDNA片段正确插入真核表达载体中;在稳定转染的CHO细胞株中可见DCN蛋白表达.结论:成功构建DCN真核表达载体pCDNA-DEC,并建立稳定转染CHO细胞株.

关键词：核心蛋白聚糖、基因表达、转染、CHO细胞

所属期刊栏目：34

分类号：R329.28(人体形态学)

资助基金：吉林省科技厅科技发展计划20061550

在线出版日期：2008-05-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：57-60