MDR1基因RNAi逆转录病毒载体的构建及表达

摘要：

目的:构建并鉴定MDR-1基因沉默载体pSUPER-retro-puro-shRNA(MDR1),并检测其对于乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR耐药表型的逆转效果.方法:根据MDR-1基因序列,利用在线软件IDTdna设计2个干扰MDR-1基因的寡聚核苷酸序列,合成回收DNA序列退火后克隆至线性化pSUPER质粒载体,重组质粒载体经双酶切电泳鉴定和测序分析后,再转染293T包装细胞产生病毒颗粒后感染MCF-7/ADR细胞.用RTPCR检测MDR1基因mRNA表达,Western blotting测定转染后MCF-7/ADR细胞中P-gp蛋白的表达量.结果:重组MDR基因沉默载体经双酶切电泳鉴定和DNA测序分析证实插入60 bp序列与原序列一致,位置正确;与对照组比较,转入MCF-7/ADR细胞后RT-PCR结果显示MDR mRNA水平明显下降,Western blotting显示P-gp蛋白表达量明显降低.结论:逆转录病毒MDR1基因沉默载体构建成功,并在MCF-7/ADR细胞中起到抑制MDR1基因表达的作用.

关键词：RNAi、MDR1、逆转录病毒载体、乳腺癌

所属期刊栏目：34

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金;吉林省科技厅科技发展计划;教育部留学回国人员科研启动基金

在线出版日期：2008-05-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：6-10