Flt3配体基因原核表达载体的构建、表达、纯化及生物学活性鉴定

摘要：

目的:获得人Flt3配体(FL)cDNA胞外段序列,构建表达人FL蛋白的原核重组表达载体并诱导其表达、纯化及鉴定目的蛋白.方法:提取K562细胞总RNA,利用巢式PCR技术扩增出目的cDNA序列,构建重组质粒pGEM-FL,经酶切、PCR和测序鉴定后,将rhFL基因亚克隆到原核表达质粒PQE30,构建重组表达质粒PQE30-rhFL,在大肠杆菌M15中诱导表达.用镍凝胶亲和层析方法纯化目的蛋白,Westren blotting杂交鉴定纯化蛋白,并用造血集落形成实验检测生物学活性.结果:经测序证实,获得的目的基因与GenBank公布的FL基因序列100%一致.构建的原核表达载体PQE30-rhFL在大肠杆菌M15中经1 mmol·L-1IPTG诱导后表达出相对分子质量为25 000的蛋白,镍柱纯化后经抗组氨酸单克隆抗体进行Westren blotting,在相对分子质量为25 000处可见特异性着色带.结论:构建了原核表达载体PQE30-rhFL,并成功诱导了rhFL蛋白的表达,通过镍凝胶亲和层析法获得纯度较高的rhFL蛋白.

关键词：配体、原核表达、巢式聚合酶链反应、遗传载体/分离与提纯

所属期刊栏目：33

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：吉林省科技厅科研项目20050402-3;20040401-5;吉林省杰出青年资助基金20050113;吉林省长春市科技发展计划项目2004218

在线出版日期：2007-05-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：381-384