补肾法通过三羧酸循环酶改善重复控制性卵巢刺激模型小鼠2-细胞胚胎发育潜能

摘要：

目的 通过观察胚胎合子基因组激活期(ZGA)三羧酸循环(TCA)酶和表观遗传修饰的关系,研究补肾调经方改善重复控制性卵巢刺激(COS)模型小鼠的2-细胞胚胎发育潜能.方法 将动情周期正常的雌性小鼠按照随机数字表法分为正常组、模型组、补肾低剂量组和补肾高剂量组,每组25只.除正常组外,其余各组小鼠建立COS模型.模型组和补肾低、高剂量组每日上午9时分别灌胃蒸馏水、补肾调经方低剂量(25.6 g/kg)和高剂量(51.2 g/kg),连续10 d.于第11天16时腹腔注射孕马血清促性腺激素(PMSG)10 IU/只,第13天16时腹腔注射人绒毛膜促性腺激素(hCG)10 IU/只;正常组注射生理盐水0.1 mL.灌胃及腹腔注射连续3个周期,每个周期间隔4 d.各组小鼠第3次腹腔注射后立即与同品系雄性小鼠合笼.次日清晨见栓或阴道涂片见精子的雌鼠记为妊娠.妊娠小鼠于末次腹腔注射hCG后44～46 h处死,在倒置显微镜下取出2-细胞胚胎观察形态并计数.免疫荧光法检测2-细胞胚胎丙酮酸脱氢酶(PDH)、柠檬酸合成酶(CS)、异柠檬酸脱氢酶(IDH3A)、性别决定区Y框蛋白2(SOX2)、组蛋白3第9位赖氨酸乙酰化修饰(H3K9ac)的蛋白表达;RT-PCR法检测2-细胞胚胎PDH、CS、IDH3A、SOX2的mRNA表达.结果 与正常组比较,模型组2-细胞胚胎数量增加(P<0.05),形态明显破碎,发育较差;PDH、CS、IDH3A、SOX2的mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05),H3K9ac蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,补肾低、高剂量组2-细胞胚胎数差异无统计学意义(P>0.05),形态发育完整,碎片较少;PDH、CS、IDH3A、SOX2的mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05),H3K9ac蛋白表达降低(P<0.05).结论 补肾调经方可在ZGA影响重复COS小鼠2-细胞胚胎的表观遗传修饰,改善胚胎发育潜能,推测其作用机制可能与影响TCA酶有关.

关键词：补肾调经方、2-细胞胚胎、三羧酸循环酶、表观遗传修饰、胚胎发育潜能、小鼠

所属期刊栏目：46

分类号：R285.5(中药学)

资助基金：国家自然科学基金No.82074486

在线出版日期：2023-03-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：207-214