脑心肌炎病毒VP1基因的克隆与原核表达

摘要：

[目的]为获得重组脑心肌炎病毒VP1蛋白.[方法]利用RT-PCR方法对脑心肌炎病毒的VP1基因进行特异性扩增,并在pEASY-Blunt Zero载体中进行克隆.测序正确后,用Nde Ⅰ和Hind Ⅲ对重组质粒进行双酶切,将目的片段连接入原核表达载体pET-30a,提取质粒pET-30a-VP1,将质粒转化进大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达和纯化.[结果]重组的结构蛋白VP1以包涵体的形式存在,纯化后获得的重组蛋白,SDS-PAGE和Western blotting双重鉴定,均在31.5 kD处出现条带,说明纯化后的蛋白为重组蛋白pET-30a-VP1.[结论]以原核系统成功表达脑心肌炎病毒VP1蛋白,进一步为犬的脑心肌炎病毒的血清学检测奠定基础.

关键词：脑心肌炎病毒、VP1基因、克隆、原核表达

所属期刊栏目：35

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：人才培养质量建设-高水平人才交叉培养-实培计划市级PXM2018 _ 014207 _ 000022

在线出版日期：2020-04-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：95-98