朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶真核表达载体构建及在293T细胞中表达条件

摘要：

乙酰胆碱酯酶(AChE;EC3.1.1.7)是神经传导中调节神经递质乙酰胆碱水平的一种关键酶,是有机磷和氨基甲酸酯类农药的主要作用靶标.目前关于朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶的真核表达还未见报道.本研究拟构建朱砂叶螨AChE的真核表达载体,进行在293T细胞中表达条件摸索.将朱砂叶螨野生型ace完整读框和去掉3’疏水区的ace基因分别插入到真核表达载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO中,经PCR和双酶切鉴定及测序验证后,成功构建了真核表达载体pcDNA3.1/ace.采用GFP报告基因确定在293T细胞中表达条件摸索,结果表明293T细胞的最适转染时间为48 h和LipofectamineTM 2000转染试剂的最适加样量为20 μL.本试验成功构建了朱砂叶螨AChE的真核表达载体,确定了在293T细胞中的表达条件,为后续筛选新型选择性AChE抑制剂奠定了基础.

关键词：乙酰胆碱酯酶、朱砂叶螨、293T细胞、转染、体外表达

所属期刊栏目：30

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金青年科学基金项目31200483;教育部科学技术重点研究项目212001;北京市教育委员会平台项目KCT2014001,KCT2015007;北京市自然科学基金项目6122005;北京市教育委员会科技计划面上项目KM201210020001;北京农学院促进人才培养综合改革专项计划BNRC&YX201404

在线出版日期：2015-11-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：24-28