朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶的表达纯化及其酶活测定条件优化

摘要：

乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AChE)是生物体内保证神经信号正常传递的关键酶,是有机磷和氨基甲酸酯类农药的作用靶标.现研究拟采用发酵罐培养含pET-30a/ace的表达菌株E.coli BL21 (DE3),大量表达纯化螨AChE,利用单因素试验和正交试验优化AChE活性的测定条件.结果表明:发酵培养的重组菌株大量表达约为68 kD的朱砂叶螨AChE蛋白.底物浓度、温度、pH和酶浓度等各测定因素对朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶活性存在显著影响.确定朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶活性测定的最佳反应条件为:底物浓度1 mmol/L,pH值7,温度35℃,酶浓度0.5 mg/mL.通过体外发酵培养纯化获得了大量的朱砂叶螨AChE重组蛋白,确定了螨AChE活性测定的最佳条件,为进一步研究其酶学性质以及AChE抑制剂的体外筛选奠定基础.

关键词：乙酰胆碱酯酶、朱砂叶螨、发酵、正交试验、方差分析、最适反应条件

所属期刊栏目：30

分类号：Q786;S433.7(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金青年科学基金项目31200483;北京市自然科学基金项目6122005;教育部科学技术重点研究项目212001;北京市教育委员会科技计划面上项目KM201210020001;北京市教育委员会平台项目KCT2014001,KCT2015007

在线出版日期：2015-11-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：9-14