板栗叶片DNA的提取及AFLP反应体系的建立

摘要：

以初展开的板栗嫩叶为材料,利用改进的CTAB法,提取到高质量的板栗叶片总DNA.通过优化酶切连接、预扩增、选择性扩增等试验条件,建立了板栗AFLP银染反应体系,得到了清晰的板栗AFLP指纹图谱.为板栗品种的分子标记和板栗品种间亲缘关系等研究奠定了基础.研究结果表明:①DNA模板的质量影响酶切以及后续的连接扩增反应.以初展开的嫩叶提取的板栗叶片总DNA纯度最高,所含蛋白质、小分子杂质少,改良的CTAB提取法可用于板栗AFLP分析,形成清晰的AFLP指纹.②先进行酶切后再进行酶连的反应体系比酶切酶连一起进行的体系效果更好.板栗基因组DNA最佳酶切反应体系为:模板DNA总量500 ng,反应体积为25μl,10×Y+/TanqoTM Buffer 2.5 μl,BSA 0.8 μl,EcoRI 5 U,MseI 5 U.连接反应体系中T-DNA连接酶浓度2 U即达最佳效果.酶切、酶连反应最佳温度均为37℃.③以板栗为材料进行AFLP标记时,E-AAC+M-CAA、E-AAC+M-CAT和E-AGT+M-CAT三个引物均获得较好的多态性.其中以E-AGT+M-CAT引物组合的扩增条带信号强度一致性好,条带分布均匀,能够得到稳定、清晰、分辨率较高的指纹谱带,可进行中国板栗的遗传变异分析.

关键词：板栗、DNA提取、AFLP遗传标记

所属期刊栏目：20

分类号：S664.2(果树园艺)

资助基金：国家科技攻关项目2004BA515B06

在线出版日期：2005-06-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：5-9