人干燥综合征A抗原克隆表达与重组蛋白及其临床应用研究

摘要：

克隆人干燥综合征A抗原基因(SSA-60kD),为SSA抗原的表达和使用重组抗原建立ELISA法用于自身抗体的临床检测.根据GenBank中检索到的人SSA-60kD cDNA序列,在5'和3'非编码区设计特异性引物,提取人源HeLa细胞总RNA作为模板,经RT-PCR扩增SSA-60kD抗原cDNA.PCR产物纯化后连接至载体PET-30a,导人大肠杆菌DH5,构建重组质粒PET-30a-sSA-60kD.对后者进行酶切鉴定、测序和分析.在大肠杆菌中表达,产生重组融合蛋白.RT-PCR扩增产物为1632bp.PET-30a-SSA-60kD经EcoR I和V双酶切证实含目的基因片段.序列分析提示与GenBank中一致.利用金属螯合亲和层析法和纯化,得到了高纯度的SSA-60kD重组蛋白.成功克隆人SSA-60kD基因,并构建PE-30a-ssA-60kD,建立了ELISA方法,检测了风湿病患者血清中抗SSA-60kD自身抗体.

关键词：人干燥综合征A抗原、cDNA克隆、重组体、ELISA

所属期刊栏目：15

分类号：R442.8(诊断学)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划重大专项基金资助项目2002AA2Z2011

在线出版日期：2008-07-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：99-104,118