重组人瘦素表达及其免疫活性鉴定

摘要：

为探讨人瘦素(leptin)在大肠杆菌中重组表达的途径,本研究用PCR方法扩增人leptin的编码区(CDS),使产物与pGEM-T easy载体相连,转染DH5α.测序后,选出阳性克隆质粒扩增.将酶切后的leptin片段与pET-28a(+)载体连接,获得leptin的表达质粒.将重组表达质粒转入BL21(DE3),测序结果显示leptinCDS没有突变产生,用IPTG诱导人重组(rh)leptin蛋白表达.表达产物进行SDS-PAGE电泳及免疫学分析.结果显示,包涵体在22 kDa蛋白处有明显的新增蛋白带,其含量超过总蛋白的50%;经Western-blot证实为重组的人(rh)leptin.本实验表明:rh-leptin在BL21(DE3)/pET-28a(+)体系中能高效表达,表达产物具有免疫活性.

关键词：瘦素、克隆、表达、融合蛋白、大肠杆菌

所属期刊栏目：13

分类号：R3(基础医学)

在线出版日期：2006-12-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：231-233