卡门柏青霉-PG3脂肪酶基因的克隆、表达及活性分析

摘要：

以卡门柏青霉-PG3为出发菌株,提取其总RNA,应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出860bp左右的片段,核苷酸序列分析表明其与甘油单-双酰酯脂肪酶(MDGL)基因(mdlA)一致.将此基因克隆到原核表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经诱导后,重组的脂肪酶(rMDGL)在宿主菌中得到表达,表达量可达菌体总蛋白量的45.2%.重组蛋白包涵体溶解、复性后用Ni2+组氨酸结合树脂螯合层析柱纯化,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示为单一区带,其相对分子质量为41 000.以橄榄油为底物时没有检测到酶活性,以单硬脂酸甘油脂为底物时酶活性达到225 nmol/s.该基因在原核系统中表达仍具有酶活性,说明MDGL的糖基化对其生物学活性并不是必不可少的.

关键词：卡门柏青霉-PG3、甘油单-双酰酯脂肪酶、基因表达

所属期刊栏目：33

分类号：TQ033;Q786(一般性问题)

资助基金：北京市重点实验室基金SYS100100421

在线出版日期：2006-03-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：12-15