幽门螺杆菌cag7-n基因克隆表达及其重组蛋白对BGC-823细胞生物学的影响

摘要：

目的：研究克隆幽门螺杆菌( Helicobacter pylori ) cag7-n 基因对 BGC-823细胞增殖和 IL-8分泌的影响.方法采用PCR技术从H. pylori基因组DNA中扩增cag7-n基因片段,构建重组质粒pET-28a-cag7-n,转化大肠杆菌BL21,经Western blot鉴定,纯化的蛋白作用于 BGC-823细胞,用 MTT 法检测蛋白对细胞增殖的影响.结果成功克隆cag7-n基因,经镍柱纯化后可获得纯度为98%的重组蛋白.纯化蛋白浓度在100,150,200μg/mL时,培养时间延长,细胞的增殖受到抑制；在相同的培养时间,细胞的增殖程度随蛋白浓度的增加而降低.结论成功克隆了cag7-n基因,并在大肠杆菌BL21中表达,经过镍柱纯化后得到纯度较高的蛋白,纯化透析后的蛋白与BGC-823细胞共培养,可诱导细胞因子IL-8在mRNA水平上的表达及其对BGC-823细胞增殖的影响.

关键词：幽门螺杆菌、cag7-n基因、克隆、增殖

分类号：Q933(微生物学)

资助基金：江苏省科技厅基金项目BS2004021;江苏大学高级人才基金项目JDG2004008

在线出版日期：2014-09-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：463-467