长链非编码RNA LINC00662/微小RNA-16-5p/wee1信号通路对肝细胞癌细胞增殖及凋亡的作用研究

摘要：

目的 探讨长链非编码RNA linc00662(LncRNA linc00662)通过微小RNA-16-5p(miR-16-5p)/[丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(wee1)]信号轴在肝细胞癌(HCC)细胞增殖及凋亡中的作用.方法 该研究时间为2019年8月至2020年10月,体外培养正常肝细胞株LO2和肝癌细胞株SK-HEP-1、HepG2、Huh-7和Li-7.采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中linc00662、miR-16-5p和wee1的表达.以HepG2细胞作为研究对象,设置shRNA阴性对照(sh-NC)组、linc00662-shRNA干扰(sh-linc00662)组、抑制剂阴性对照(inhibitor-NC)组、miR-16-5p抑制剂(miR-16-5p inhibitor)组、siRNA阴性对照(si-NC)组、wee1-siRNA干扰(si-wee1)组、linc00662-shRNA干扰联合miR-16-5p抑制剂(sh-linc00662+miR-16-5p inhibitor)组和miR-16-5p抑制剂联合wee1-siR?NA干扰(miR-16-5p inhibitor+si-wee1)组.CCK-8和克隆形成实验检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞凋亡水平;蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白基因(Bax)]表达.双萤光素酶报告基因实验检测linc00662、miR-16-5p和wee1之间的相关性.结果 PCR结果显示相比较LO2细胞,linc00662在SK-HEP-1、HepG2、Huh-7和Li-7细胞中普遍高表达[0.95±0.14比2.12±0.17、3.86±0.15、2.31±0.14、1.82±0.18,P<0.001].与sh-NC组相比,敲低linc00662能抑制肝癌细胞增殖(P<0.001)并诱导细胞凋亡(P<0.001).双萤光素酶报告结果显示linc00662直接靶向结合miR-16-5p并负调控miR-16-5p的表达.同时,miR-16-5p直接靶向结合wee1并负调控wee1的表达.下调miR-16-5p表达可以减轻敲低linc00662对肝癌细胞生长的抑制作用.此外,linc00662可能通过miR-16-5p/wee1通路发挥促癌作用.结论 Linc00662是一种在肝癌细胞中上调的LncRNA,可以通过miR-16-5p/wee1轴促进肝癌细胞增殖并抑制细胞凋亡.

关键词：癌、肝细胞、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1、微小RNA-16-5p、lncRNA linc00662、增殖、凋亡

所属期刊栏目：27

分类号：R735.7;R318.01;Q78

资助基金：昆明市科技计划2017-1-S-15304

在线出版日期：2023-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：790-796