粗糠柴毒素上调微小RNA-204-5p对脂多糖所致心肌损伤的保护机制研究

摘要：

目的 探讨粗糠柴毒素对脂多糖(LPS)所致心肌损伤的影响及其保护机制.方法 该研究自2018年9月至2019年4月,用终浓度为10 mg/L的LPS刺激HCM、AC16心肌细胞6 h,分别加入终浓度为0.5μmol/L、1.0μmol/L、1.5μmol/L、2.0μmol/L粗糠柴毒素(Rottlerin)再处理12 h后分别记为LPS+0.5μmol/L Rottlerin组、LPS+1.0μmol/L Rottlerin组、LPS+1.5μmol/L Rottler?in组、LPS+2.0μmol/L Rottlerin组,以单纯10 mg/L LPS处理的为LPS组,以未经粗糠柴毒素和LPS处理的为对照组.将模拟物阴性对照(miR-NC)、微小RNA-204-5p模拟物(miR-204-5p)、抑制剂阴性对照(anti-miR-NC)、miR-204-5p抑制剂(anti-miR-204-5p)分别转染至未经任何处理的HCM细胞中,记为miR-NC组、miR-204-5p组、anti-miR-NC组、anti-miR-204-5p组.将miR-NC,miR-204-5p转染至单纯10 mg/L LPS处理的HCM细胞中,记为LPS+miR-NC组,LPS+miR-204-5p组.将anti-miR-NC、anti-miR-204-5p、过表达空载体(pcDNA3.1)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)过表达载体(pcDNA3.1-HMGB1)转染至2.0μmol/L粗糠柴毒素和10 mg/L LPS处理HCM细胞中,记为LPS+Rottlerin+anti-miR-NC组、LPS+Rottlerin+anti-miR-204-5p组、LPS+Rottlerin+pcD?NA3.1组、LPS+Rottlerin+pcDNA3.1-HMGB1组.MTT法检测各组细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-204-5p和HMGB1 mRNA的表达水平;蛋白质印迹法检测蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性.结果 与对照组相比,LPS组心肌细胞HCM、AC16抑制率显著升高,HCM细胞中miR-204-5p(0.30±0.03比1.99±0.08)和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)表达显著下降,Bax、HMGB1(1.04±0.10比0.26±0.02)表达和凋亡率[(27.79±2.23)％比(5.61±0.05)％]显著升高;相较于LPS组,LPS+0.5、1.0、1.5、2.0μmol/L Rottlerin组HCM、AC16细胞抑制率显著降低,HCM细胞中miR-204-5p(0.46±0.04、0.54±0.05、0.76±0.04、0.88±0.07比0.30±0.03)和Bcl-2表达显著升高,Bax、HMGB1(0.93±0.09、0.80±0.08、0.62±0.06、0.53±0.05比1.04±0.10)表达和凋亡率[(22.61±2.14)％、(20.06±1.94)％、(11.71±1.01)％、(9.16±1.00)％比(27.79±2.23)％]显著降低,呈浓度依赖型.与LPS+miR-NC组相比,LPS+miR-204-5p组HCM细胞中miR-204-5p(0.86±0.07比0.42±0.03)和Bcl-2表达升高,Bax表达及细胞抑制率和凋亡率[(15.76±1.32)％比(27.26±2.25)％]降低.miR-204-5p可靶向调控HMGB1;抑制miR-204-5p表达、过表达HMGB1均能逆转Rottlerin对LPS作用的心肌细胞HCM的保护作用.结论 粗糠柴毒素对LPS所致的心肌细胞损伤有保护作用,其机制主要是通过上调miR-204-5p表达,进而抑制HMGB1的表达发挥作用.

关键词：野桐属植物、高迁移率族蛋白B1、粗糠柴毒素、微小RNA-204-5p、脂多糖、心肌损伤

所属期刊栏目：26

分类号：R73;R3;R981+.1

在线出版日期：2022-11-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：2368-2374