微小RNA-199a-5p调控Klotho表达对体外脑缺血再灌注大鼠氧-葡萄糖剥夺/再灌注诱导的肾上腺嗜铬瘤细胞损伤的保护作用

摘要：

目的 探究抑制微小RNA-199a-5p(miR-199a-5p)表达对体外脑缺血再灌注(I/R)损伤大鼠模型氧-葡萄糖剥夺/再灌注(OGD/R)诱导的肾上腺嗜铬瘤细胞(PC12)损伤的保护作用,并进一步探讨Klotho在该过程中的作用.方法 将PC12细胞分为Control组、OGD/R组、miR-NC inhibitor组、miR-199a-5p inhibitor组、miR-199a-5p inhibitor+shRNA-pLKO.1组和miR-199a-5p inhibitor+shRNA-Klotho组.RT-qPCR或蛋白质印迹法(Western blotting)确定各组PC12细胞转染效率;胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)和流式细胞术确定各组PC12细胞活力和凋亡率;试剂盒测量各组PC12细胞中活性氧(ROS)释放量、丙二醛(MDA)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组PC12细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和白细胞介素-6(IL-6)水平;双荧光素酶报告基因实验检测miR-199a-5p与Klotho靶向关系.结果 在OGD/R诱导的PC12细胞中,miR-199a-5p表达增高,Klotho表达降低;细胞活力降低,凋亡率增高;ROS释放量和MDA含量以及TNF-α、IL-1β、MCP-1和IL-6水平升高,SOD和GSH-Px活性降低(P<0.05).转染miR-199a-5p抑制物减弱了OGD/R的诱导PC12细胞活力下降和细胞凋亡率增高;削弱了暴露于OGD/R的PC12细胞中ROS释放量和MDA含量以及TNF-α、IL-1β、MCP-1和IL-6水平,并提高了SOD与GSH-Px活性(P<0.05),而miR-199a-5p抑制物对OGD/R诱导PC12细胞的这些作用可被敲低的Klotho逆转(P<0.05).另外,miR-199a-5p负靶向调控Klotho表达(P<0.05).结论 抑制miR-199a-5p通过靶向Klotho减轻氧化应激和炎症反应来改善OGD/R诱导的PC12细胞损伤.

关键词：PC12细胞、再灌注损伤、嗜铬细胞瘤、微小RNA-199a-5p、氧-葡萄糖剥夺/再灌注损伤、氧化应激、炎症反应、Klotho

所属期刊栏目：26

分类号：R714.2;S826.2;R3

资助基金：河南省医学科技攻关项目20170101210

在线出版日期：2022-11-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：2285-2291