下调微小RNA-183表达对肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞增殖凋亡的影响及机制

摘要：

目的 探讨下调微小RNA(miR)-183表达对肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞增殖凋亡的影响及机制.方法 2018年12月至2019年7月,体外培养SK-NEP-1细胞,分为对照组(细胞正常培养)、抑制剂阴性对照组(Anti-NC组)(转染Anti-NC至SK-NEP-1细胞)、miR-183抑制剂组(Anti-miR-183组)(转染Anti-miR-183至SK-NEP-1细胞)、Anti-miR-183+小干扰RNA阴性序列(si-NC)组(共转染Anti-miR-183和si-NC至SK-NEP-1细胞)和Anti-miR-183+程序性细胞死亡4小干扰RNA(si-PDCD4)组(共转染Anti-miR-183和si-PDCD4至SK-NEP-1细胞),实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)测定miR-183,MTT法检测细胞增殖变化,平板克隆实验检测细胞克隆能力,流式细胞术测定细胞凋亡变化,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞中活化胱天蛋白酶-3(cleaved-caspase-3)和PDCD4蛋白水平.双荧光素酶报告基因实验验证miR-183与PDCD4的靶向关系.结果 Anti-miR-183组miR-183表达水平为(0.32±0.04),显著低于Anti-NC组(0.98±0.11)(P<0.05).Anti-miR-183组细胞增殖活性为(0.20±0.02)、克隆形成数为(213.69±20.94)个,均低于Anti-NC组[(0.40±0.03)、(312.87±22.28)个](P<0.05);Anti-miR-183组细胞凋亡率为(16.47±1.58)％、cleaved-caspase-3蛋白水平为(0.69±0.09),均高于Anti-NC组[(2.36±0.32)％、(0.27±0.04)](P<0.05).对照组与Anti-NC组各检测指标比较均差异无统计学意义(P>0.05).PDCD4是miR-183的靶基因,且Anti-miR-183组细胞中DCD4蛋白水平为(0.89±0.07),显著高于Anti-NC组(0.37±0.06)(P<0.05).Anti-miR-183+si-PDCD4组细胞增殖活性为(0.32±0.04),克隆形成数为(286.47±20.65)个,PDCD4蛋白水平为(0.45±0.05),均高于Anti-miR-183+si-NC组[(0.21±0.03)、(216.20±13.68)个,(0.86±0.09)](P<0.05);Anti-miR-183组细胞凋亡率为(10.79±1.28)％、cleaved-caspase-3蛋白水平为(0.30±0.03),均低于Anti-miR-183+si-NC组[(17.93±1.64)％、(0.72±0.08)](P<0.05).结论 下调miR-183通过靶向调控PDCD4抑制肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞增殖并诱导凋亡.

关键词：肾母细胞瘤;微小RNA-183;凋亡;胱天蛋白酶-3;PDCD4

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在线出版日期：2022-03-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：553-557