DEAD-box解螺旋酶46基因沉默对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

摘要：

目的 分析短发夹RNA(shRNA)介导DEAD-box解螺旋酶46(DDX46)基因沉默对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western Blot)测定人正常乳腺上皮细胞系和乳腺癌细胞系中DDX46表达差异.以慢病毒介导的shRNA敲低乳腺癌SK-BR-3细胞中DDX46的表达,实验分为空白对照组、阴性对照组和sh-DDX46组.RT-qPCR检测各组细胞DDX46 mRNA的表达水平,蛋白质印迹法检测DDX46蛋白和凋亡相关蛋白的表达水平,克隆形成和四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞生长增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 DDX46 mRNA在各乳腺癌细胞系中的表达量均高于正常乳腺上皮细胞(P<0.05).sh-DDX46组细胞DDX46 mRAN和蛋白表达水平均明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05).sh-DDX46组的细胞生长增殖能力明显低于两对照组(P<0.05).空白对照组、阴性对照组和sh-DDX46组SK-BR-3细胞凋亡率分别为(4.21±1.65)％、(5.36±1.23)％和(10.21±2.39)％,与空白对照组和阴性对照组相比,sh-DDX46组SK-BR-3细胞凋亡率明显增加(P=0.007;P=0.016).沉默DDX46后凋亡通路蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的表达量明显降低(P<0.05),Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸蛋白酶-3剪切体(cleaved Caspase-3)表达明显增高(P<0.05).结论 DDX46在乳腺癌细胞中高表达,沉默DDX46基因能够抑制乳腺癌细胞增殖并促进凋亡,凋亡信号通路可能是其作用机制之一.

关键词：乳腺肿瘤、RNA解螺旋酶类、Bcl-2相关X蛋白质、DDX46、短发夹RNA、细胞凋亡

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在线出版日期：2020-12-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：2489-2493,后插5